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                > 首页 > 客户支持 > 常见问题
                • 能否进行外◎泌体中mRNA或lncRNA的检测?

                  除Small RNA外,也可以对外泌体中其他RNA进行检测。但外泌】体中的mRNA、lncRNA等大分子量RNA,含量较低、数量较少,并且稳定∩性比Small RNA差,容易发生降解,检测的稳定性与重复性不如Small RNA。
                • 外泌体◤的分离采用哪一种技术更好?

                  由于样本性质和来源不一,目前仍没有一种方法能兼顾外泌体得率、纯度及生物活█性。目前外◣泌体分离技术大致分为两类:超速离心和提取试剂〇盒。

                  超速离心:是囊泡分离的“金标准”,外泌体得率较ㄨ高;但对实验仪器要求特殊,耗时较长,无法实现□ 高通量。

                  提取试剂〇盒:基于外泌体表达的特异性表面抗原,利用相应的抗体通过免疫亲和分离,无须超●速离心,耗时较短,可实现高通量;但相比超速离心,外¤泌体得率较低。
                  目前吉@康医学分离外泌体采用的是 Qiagen ExoEasy kit。

                • 哪些样品类型适合开展外泌体Small RNA测序?

                  外泌体主要存在于体液中,根♀据体液类型不同,其外泌体含量有较大差别,一般在血清/血浆中含量相◥对较高,而细胞培养♀上清、尿液、唾液等中外泌体含量偏低,因此建议优先选择血清/血浆样品进行相≡应实验(细胞培养上清需要提供50 ml以上)。
                • 为什么裸鼠皮下注射肿瘤细胞开始成瘤,可见隆起,后来又㊣消失了呢?

                  这种情况其》实还是没有成瘤。成瘤过程一般是细胞注射后有圆形小包,然后很快消失№№,再隆起(一般是组织液),再变小变红(血管生成),最后肿瘤快速生⊙长。因此没有成瘤只是第二阶段╱,建议调整一下细胞注射量、更换实验鼠或添加一些促进细胞生长的因子』试试。

                • 转录组测序的技术重复性很高,那是否还有必要设生物学重复?

                  有必要,至少需要两次★生物学重复,3次以上的生物学重复更好。2011年7月Hansen发表的文章表明生物学差异是基因自身〓表达的特性,与检测技术的选择以及数据处理的方式无关。如果不设生物学重复,高影响因子的杂志可能会因此≡而拒稿。

                • 样本收集与储存的注意点有哪些?

                  四个要点需要注意:一是要快,尽快洗净或处理,处理后快速冷▲冻。细胞可以直接用Trizol裂解后▂冷冻,组织洗净后,分成小块直接冷冻;二是低温,先浸入液氮,数小时后〒再放入-70或-80度超低温冰箱缓冻为佳。超低温冰箱可以保存数月至一年以上,-20度ξ 不宜久存;三是避免温度波动,一台经常开关门,温度上下波动的-80度冰箱,可能◆冷冻效果还不如一天稳定在-40度的冰箱;四是推荐进口冻存管,标签冷冻后容易︼破碎,不妨自己用记号笔进行标记。

                • 如何避免组内差异过大的现象?

                  组内差异大主要表现是组内老鼠有的长不出肿瘤∩组织,有的缺长得很大。原因很多,其一可能是接种悬液没有摇匀,这种可▃能性较小;其二是可能存在一定的个体差异,鼠龄是一个很大的影响因素,建议控制好实验条件,动∞物周龄控制在5-6周左右,体重均一,健康状态一致。

                • 关于“样品重复”,技术重复和上机重复有什么区别?发表的文章一般要求几次重复呢?

                  优先建议做3次实验∏重复,符合一般的文章对实验Ψ数据的要求,不建议使用两重复或只做一次,可能引起审稿人和编辑的质疑。

                  技术重复一般和上机︽重复非常类似,即上质谱的重复,即测〓试仪器的稳定性,判断系统误差等问题。而应用¤型的文章中,上机重复或技术重复一般没有硬性规定,可以不做,如果做了当然最◣好,Editor就不会再此处找你的问题。

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